加入细胞疏散液 加入样本 离心后分层 网络富集细胞、重复洗涤
1) 将抗凝样本(血或骨髓,,,,,若是需要可以专心理盐水稀释)延管壁缓慢倒入或用移液管延管壁缓慢加入到疏散管中:若是用15ml的疏散管建议使用4-9ml样本;;;;;;若是用50ml的疏散管建议使用13-30ml样本。。。。。
2) 室温下离心,,,,,离心力为1200 x g需要10分钟,,,,,关闭离心机。。。。。关于安排24h以上的样品,,,,,建议离心时间加长。。。。。
3) 离心后液体疏散情形(从上到下)为:a血浆 ;;;;;;b富集的细胞部分(中心相包括淋巴细胞/PBMCs细胞);;;;;;c疏散液;;;;;;d嵌套;;;;;;e沉淀(红细胞和粒细胞)。。。。。收罗或扬弃富集细胞所在层以上5到10mm的血浆层有助于避免富集细胞被血小板再次污染。。。。。
4) 收获富集细胞(淋巴细胞/PBMCs细胞),,,,,将疏散管中上清倒入另一清洁离心管中,,,,,疏散管中的嵌套能有用阻止富集细胞被红细胞和粒细胞再次污染。。。。。建议不要将疏散管倒置2s以上。。。。。
5) 用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤富集细胞(淋巴细胞/PBMCs细胞),,,,,然后在250 x g离心力下离心10分钟。。。。。
6) 按办法5重复洗涤2次,,,,,最后用5ml PBS缓冲液重新悬浮细胞。。。。。
注重事项/ Cautions
1) 本产品应由经由专业培训的职员操作,,,,,并遵守优异的实验室规范。。。。。
2) 请勿重复使用疏散管。。。。。
3) 由于各品牌离心机的性能差别,,,,,地区温度情形差别,,,,,可能影响疏散效果,,,,,用户可以调理离心转速和离心的时间,,,,,探索最佳的疏散条件(详细疏散条件由各实验室自定)。。。。。
4) 可用于人类外周血、骨髓和脐带血样本。。。。。它不适用于白细胞疏散样本、血沉棕黄层样本或凌驾48小时的样本。。。。。
5) 离心后,,,,,细胞可能群集在富集层以上的疏散管的管壁上。。。。。这种聚合是正常的,,,,,受样实质量、样本安排时间和抗凝剂类型的影响。。。。。此聚合与疏散管的使用无关。。。。。细胞可以通过使用移液管尖端刮管壁的一侧来扫除。。。。。
6) 处置惩罚任何生物泉源的标本,,,,,使用采血针、采血管系列、相关仪器等一定要注重按严酷的操作规程使用。。。。。请把标本当成可能熏染 HIV、HBV、HCV等熏染病的危险物质处置惩罚。。。。。为阻止操作时熏染的危险,,,,,请使用一次性手套。。。。。