实验质料：
基础作育基
血清（通例为FBS/NBS）
无菌PBS磷酸盐缓冲液
电动移液枪
移液枪
超净事情台
无菌二甲基亚砜（DMSO）
针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
程序降温盒[NEST]
PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
移液管[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
实验准备：
冻存液准备：
一样平常的细胞：55%基础作育基+40%牛血清（FBS/NBS）+5%DMSO
主要的细胞：90%牛血清（FBS/NBS）+10%DMSO
冻存液设置完成后 ，，，，，，，，15ml离心管分装 ，，，，，，，，4℃条件下贮存备用。。。。。 。若设置量较大 ，，，，，，，，可分装入50ml离心管 ，，，，，，，，-20℃条件下冷冻贮存。。。。。 。（若牛血清内保存析出沉淀物 ，，，，，，，，接纳0.22μm 滤膜过滤除菌）
使用前37℃水浴加热
待冻存细胞：
使细胞冻存前 ，，，，，，，，选择细胞生长状态优异 ，，，，，，，，且处于对数生恒久的细胞 ，，，，，，，，冻存前12~24h换新鲜作育基维持细胞状态。。。。。 。
实验流程：
视察待冻存细胞密度 ，，，，，，，，约为80%~90%。。。。。 。用移液枪吸出陈腐作育基 ，，，，，，，，加入无菌PBS洗濯细胞1-2次 ，，，，，，，，去除作育情形中的残留作育基。。。。。 。
加入适量对应胰酶或消化液 ，，，，，，，，使胰酶没详尽胞 ，，，，，，，，放入作育箱消化。。。。。 。显微镜下视察细胞状态 ，，，，，，，，胞质回缩 ，，，，，，，，细胞间不再毗连成片 ，，，，，，，，此时加入完终止液终止消化。。。。。 。
用吸头轻轻奏乐细胞 ，，，，，，，，形成细胞悬液 ，，，，，，，，将细胞悬液1000rpm ，，，，，，，，离心3-5min。。。。。 。扬弃上清 ，，，，，，，，加入适量预先配制好的冻存液 ，，，，，，，，轻轻奏乐使细胞匀称并计数。。。。。 。用冻存液调理的细胞密度 ，，，，，，，，使之终密度为5×106/ml～1×107/ml。。。。。 。
用移液枪凭证预计容量 ，，，，，，，，分装入细胞冻存管[NEST]中 ，，，，，，，，接纳自动旋盖机[NEST]旋盖密封。。。。。 。
标准的冻存程序为降温速率况处-1℃～-2℃/ min ，，，，，，，，可将待冻存细胞凭证以下办法逐步冻存：室温→4℃（20min）→-20℃（30min）→-80℃（住宿）→液氮恒久生涯。。。。。 。
也可将待冻存放入程序降温盒[NEST] ，，，，，，，，直接-80℃住宿 ，，，，，，，，再转移至液氮生涯。。。。。 。
使用到的NEST产品：
无菌二甲基亚砜（DMSO）
针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
程序降温盒[NEST]
PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
移液管[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
